熱敏UDG酶說明書

更新時間：2023-10-24 點(diǎn)擊次數(shù)：689

產(chǎn)品詳情

UDG酶可催化水解DNA中的尿嘧啶堿基與核糖之間的N-糖苷鍵，釋放游離尿嘧啶堿基。本產(chǎn)品來源于大腸桿菌重組表達(dá)的嗜冷細(xì)菌的ung基因，分子量為 25KDa。本酶催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈 DNA 釋放游離尿嘧啶，對 RNA 無活性。本酶主要應(yīng)用于防止PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。它的作用原理基于：在 PCR 反應(yīng)中以 dUTP 替代 dTTP 摻入 DNA 中，形成含 dU 堿基的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物，UDG 能選擇性斷裂單鏈和雙鏈 DNA 中 dU 堿基的糖苷鍵，降解 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物，消除上輪擴(kuò)增產(chǎn)物對新樣本的污染問題。

特點(diǎn)

? 25-37度范圍內(nèi)活性高，避免了ji端熱敏UDG常溫失活的缺陷；

? 本酶在60℃下熱處理10分鐘，完quan不可逆失活；

? 本酶的反應(yīng)體系與Taq DNA聚合酶buffer相同，保證了活性體系的一致性。

濃度

1U/μl

活性定義

37℃反應(yīng)條件下，每分鐘催化 60 pmole尿嘧啶堿基從含尿嘧啶的雙鏈 DNA 上釋放所需要的酶量為 1 U。

活性測定條件

10 mM Tris-HCl (pH 8.3, 25°C), 20 mM KCl, 10 mM (NH4)2SO4, 0.01% Tween 20, 1.5 mM MgCl2 中，37℃ 溫育。

酶貯存緩沖液

20mM Tris-HCl (pH 7.5), 100mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 0.05% Tween 20, 50% glycerol。

產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

Component	78DC10123-200U	78DC10123-1000U
熱敏UDG	200U	1000U
10×UDG Buffer	0.4 ml×1	1.0 ml×1

運(yùn)輸與保存

-20℃保存藍(lán)冰運(yùn)輸

適用范圍

主要應(yīng)用于防止PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。作用原理基于：在 PCR 反應(yīng)中以 dUTP 替代 dTTP 摻入 DNA 中，形成了含 dU 堿基的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物，UDG能選擇性斷裂單鏈和雙鏈 DNA 中 U 堿基的糖苷鍵，降解 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物，消除上輪擴(kuò)增產(chǎn)物對新樣本的污染問題。

應(yīng)用舉例

防止PCR產(chǎn)物污染的使用方法

1. 按如下表格配制PCR反應(yīng)液

PCR組份	體積/μl	終濃度
10×Taq酶 Buffer	5	1×
dNTPs（2.0 mM）	5	0.2 mM
dUTP（2.0 mM）	1-5	0.04-0.2 mM
引物F（10 μM）	1.5	0.3 μM
引物R（10 μM）	1.5	0.3 μM
Template	1-5	/
熱啟動Taq聚合酶（2.5U/μl）	1.0	2.5U
熱敏UDG（1U/μl）	1.0	1U
ddH2O	Varable	/
總體積	50	/

2. 37℃下反應(yīng)10分鐘。

3. 在95℃下熱失活UDG 2分鐘（此步驟可省略，直接進(jìn)行PCR，預(yù)變性步驟會失活UDG）。

4. PCR反應(yīng)。

質(zhì)量控制

無內(nèi)切酶活性：50 U的本酶和1 μg的pBR322 DNA在37℃下反應(yīng)2小時，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。

品名	貨號	規(guī)格	品牌
熱敏UDG酶	78DC10123-200U	200U	BIOHUB
熱敏UDG酶	78DC10123-1000U	1000U	BIOHUB

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